Introdução: O diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC) é de grande importância no controle da leishmaniose visceral, uma das doenças mais negligenciadas no mundo e de grande importância no campo da saúde pública. O teste Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) é amplamente utilizado pela possibilidade de diagnóstico em larga escala e baixo custo. Objetivo: Para otimizar a estequiometria do conjugado utilizado no kit EIE/CVL, foram modificados alguns parâmetros de conjugação e monitorização através de cromatografia de exclusão molecular no melhoramento do produto final. Método: O conjugado produzido por Bio-Manguinhos por purificação foi otimizado utilizando a cromatografia de gel de filtração SEC e foi avaliado através do desempenho do kit EIEleishmaniose-visceral-canina-Bio-Manguinhos (EIE-LVC). Os conjugados foram produzidos com diferentes estequiometrias (IgG X peroxidase): conjugado atual, conjugado otimizado e conjugado otimizado e purificado. Resultados: A homogeneidade das médias dos conjugados no teste ELISA foi avaliada através do teste qui-quadrado, evidenciando assim a normalidade e confiabilidade dos dados. Com base nos dados estatísticos, amostras positivas obtidas pelo teste ELISA apresentaram homogeneidade ao nível de significância de 0,05, ou seja, grau de confiabilidade dos dados de 95%. A otimização da produção do conjugado anti-IgG canino, componente de suma importância utilizado na composição do Kit Bio-Manguinhos EIE LVC, contribuiu para assegurar a qualidade do kit e melhor diagnóstico da doença leishmaniose visceral canina, tornando-os mais sensíveis e de baixo custo para a saúde pública. Conclusões: Este trabalho demonstra que é possível otimizar o conjugado Anti-IgG Peroxidase Canina (HRP) utilizado no Kit EIE CVL, tornando-o mais específico e, em última análise, mais viável economicamente.