Revista Fitos
Considerando a necessidade de um método rápido, barato e poderoso para a rotina de controle de qualidade, a Densitometria / Cromatografia de Camada Delgada foi um método escolhido para atender a essas solicitações. No entanto, essa técnica tem suas limitações quando usada para ensaios de determinação de substâncias em matrizes complexas, como extratos vegetais. Considerando a restrição da técnica cromatográfica durante o desenvolvimento de metodologias analíticas para medicamentos, foi desenvolvido um novo procedimento para superar a dificuldade em obter os parâmetros de validação dentro dos critérios internacionais de aceitação, principalmente os parâmetros de seletividade e repetibilidade. O método desenvolvido foi aplicado na quantificação de ácido betulínico (BA) a partir de extratos de produtos naturais. Todas as separações foram obtidas nas cromatoplacas Si60 F254 com n-hexano: acetato de etila: ácido acético (7: 3: 0,3) a 560 nm, após derivatização com reagente vanilina-sulfúrica. O sistema forneceu pontos compactos para BA (Rf. 0,5) e exibiu linearidade (R2 = 0,999). A metodologia foi comparada com uma metodologia de cromatografia gasosa validada e nenhuma diferença estatística foi observada.
DOI
10.32712/2446-4775.2020.998
Autores
Palavras-chave
Identificação
Referências do artigo
Galgon T, Höke D, Dräger B. Identification and Quantification of Betulinic Acid. Phytochem Analysis. 1999; 10: 187-190. ISSN 1099-1565. [CrossRef].
Frighetto N, Welendorf RM, Silva AMP, Nakamura MJ, Siani AC. Aplicação de cromatografia centrífuga de contra-corrente na purificação de ácido ursólico das folhas de Eugenia brasilensis Lam. Rev Bras Farmacogn. 2005; 15(4): 338-343. ISSN 1981-528X. [CrossRef].
Takeoka G, Dao L, Teranishi R, Wong R, Flessa S, Harden L, Edwards R. Identification of Three Triterpenoids in Almond Hulls. J Agric Food Chem. 2000; 48(8): 3437-3439. ISSN 1520-5118. [CrossRef] [PubMed].
Khan I, Sangwan PL, Dhar JK, Koul S. Simultaneous quantification of five marker compounds of Betula utilis stem bark using a validated high-performance thin-layer chromatography method. J Sep Sci. 2012; 35(3): 392-399. ISSN 1615-9314. [CrossRef] [PubMed].
Kaale E, Risha P, Layloff T. TLC for pharmaceutical analysis in resource limited countries. J Chromatog A. 2011; 1218(19): 2732-2736. ISSN 0021-9673. [CrossRef] [PubMed].
Renger B, Végh Z, Ferenczi-Fodor K. Validation of thin layer and high performance thin layer chromatographic methods. J Chromatog A. 2011; 1218(19): 2712-2721. ISSN 0021-9673.[CrossRef].
Kashmir BP, Suman KI, Gunvant KY, Mamta BS. Development and Validation of HPTLC Method for Determination of Betulinic Acid in Helicteres isora root Extract. J Chem Tech. 2010; 2: 851-855. [Link].
Ferenczi-Fodor K, Renger B, Végh Z. The frustrated reviewer – Recurrent failures in manuscripts describing validation of quantitative TLC/HPTLC procedures for analysis of pharmaceuticals. J Planar Chromatog. 2010; 23(3): 173-179. ISSN 1789-0993. [CrossRef].
Oprean R, Tamas M, Roman L. Comparison of GC-MS and TLC techniques for asarone isomers determination. J Pharmaceut Biomed Anal. 1998; 18: 227-234. ISSN 0731-7085. [CrossRef] [PubMed].
Akowuah GA, Zhari I, Norhayati I, Mariam A. HPLC and HPTLC densitometric determination of andrographolides and antioxidant potencial of Andrographis paniculata. J Food Compost Anal. 2006; 19: 118-126. ISSN 0889-1575. [CrossRef].
Andrade JM, Estévez-Pérez MG. Statistical comparison of the slopes of two regression lines: A tutorial. Anal Chim. Acta. 2014; 838: 1-12. ISSN 0003-2670. [CrossRef].
Cochran WG. The distribution of the largest of a set of estimated variances as a fraction of their total. Annals Eug. 1941; 11(1): 47-52. [CrossRef].
Signab ANB, El-Beshbishy HA, Yonekawa M, Nomura T, Fukai T. Hypoglycemic effect of Egyptian Morus alba root bark extract: effect on diabetes and lipid peroxidation of streptozotocin-induced diabetic rats. J Ethnopharm. 2005; 100(3): 333-338. ISSN 0378-8741. [CrossRef] [PubMed].
David JM, Souza JC, Guedes MLS, David JP. Estudo fitoquímico de Davilla rugosa: flavonoides e terpenóides. Rev Bras Farmacogn. 2006; 16(1): 105-108. ISSN 1981-528X. [CrossRef].
Kumar D, Mallick S, Vedasiromoni JR, Pal BC. Anti-leukemic activity of Dillenia indica L. fruit extract and quantification of betulinic acid by HPLC. Phytomedicine. 2010; 17(6): 431-435. ISSN 0944-7113. [CrossRef].
Castilho RO, Oliveira RR, Kaplan MAC. Licanolide, a new triterpene lactone from Licania tomentosa. Fitoterapia. 2005; 76: 562-566. ISSN 0367-326X. [CrossRef] [PubMed].
Castilho RO, Kaplan MAC. Constituintes químicos de Licania tomentosa Benth. (Chrysobalanaceae). Quim Nova. 2008; 31(1): 66-69. ISSN 0100-4042. [CrossRef].
Mukherjee PK, Pal M, Pal SK, Saha K, Saha BP. Pharmacognostical profiles of rhizomes of Nelumbo nucifera Gaenth. Anc Sci Life. 1998; 17(4): 273-279. [PubMed].
Frighetto N, Welendorf RM, Silva AMP, Nakamura MJ, Siani AC. Purification of betulinic acid from Eugenia florida (Myrtaceae) by high-speed counter-current chromatography. Phytochem Anal. 2005; 16(6): 441-444. ISSN 0958-0344. [CrossRef] [PubMed].
Baltina LA, Flakhter OB, Nigmatullina LR, Boreko EI, Pavlova NI, Nikoleave SN et al. Lupane triterpenes and derivatives with antiviral activity. Bioorg Med Chem Lett. 2003; 3: 3549-3552. ISSN 0960-894X. [CrossRef] [PubMed].
Sami A, Taru M, Salme K, Jari Y-K. Pharmacological properties of the ubiquitous natural product betulin. Eur J Pharmac Sci. 2006; 29: 1-13. ISSN 1879-0720. [CrossRef]. [PubMed].
Aguirre MC, Delporte C, Backhouse N, Erazo S, Letelier ME, Cassels BK et al. Topical anti-inflammatory activity of 2alpha-hydroxy pentacyclic triterpene acids from the leaves of Ugni molinae. Bioorgan Med Chem. 2006; 14(16): 5673-5677. ISSN 0968-0896. [CrossRef] [PubMed].
Mukherjee PK, Saha K, Das J, Pal M, Saha BP. Studies on the AntiInflamatory Activity of Rhizomes of Nelumbo nucifera. Plan Med. 1997; 63(4): 367-369. ISSN 1439-0221. [CossRef] [PubMed].
Schmidt ML, Kuzmanoff KL, Ling-Indeck L, Pezzuto JM. Betulinic acid induces apoptosis in human neuroblastoma cell lines. Europ J Cancer. 1997; 33(12): 2007-2010. ISSN 1879-0852. [CrossRef] [PubMed].
Pisha E, Chai H, Lee I, Chagwedera TE, Farnsworth NR, Cordell GA et al. Discovery of betulinic acid as a selective inhibitor of human melanoma that functions by induction of apoptosis. Nat Med. 1995; 1: 1046-1051. ISSN 1546-170X. [CrossRef] [PubMed].
Fulda S, Jeremias I, Sieiner HH, Pietsch T, Debatin KM. Betulinic acid: A new cytotoxic agent against malignant brain-tumor cells. Int J Cancer. 1999; 82: 435-441. ISSN1097-0215. [CrossRef] [PubMed].
Ehrhardt H, Fulda S, Fuhrer M, Debatin KM, Jeremias I. Betulinic acid-induced apoptosis in leukemia cells. Leukemia. 2004; 18: 1406-1412. ISSN 1476-5551. [CrossRef] [PubMed].
Mukherjee D, Kumar NS, Khatua T, Mukherjee PK. Rapid validated HPTLC method for estimation of betulinic acid in Nelumbo nucifera (Nymphaeaceae) rhizome extract. Phytochem Anal. 2010; 21: 556-560. ISSN 1099-1565. [CrossRef] [PubMed].
ICH-Q2(R1). Validation of Analytical Procedures: Methodology International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. Geneva, Switzerland 2005. Disponível em: [Link].
AOAC_Peer. Verified Methods Program, Manual on Policies and Procedures, Appendix D: Guidelines for Collaborative Study Procedures to Validate Characteristics of a Method of Analysis. Off Met Anal Manual. USA, 2002. Disponível em: [Link].
Eurachem guide: The Fitness for Purpose of Analytical Methods - A Laboratory Guide Method Validation and Related Topics. 2nd ed. 2014. Disponível em: [Link].
Página da publicação
Publicado por (Instituto)